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    重磅產品推薦—Meilunbio 細胞膜熒光探針系列?。?!

    更新時間:2020-08-25

    Meilunbio 細胞膜探針系列重磅產品

    MB6190 DiD細胞膜熒光探針紅色

    (DiD Perchlorate)10MG [¥400.00]

    MB4239 DiO細胞膜熒光探針綠色

    (DiO perchlorate)10MG [¥400.00]

    MB4240 DiI細胞膜熒光探針橙紅色 

    (Dii perchlorate)10MG [¥400.00]

    MB12482 DiR細胞膜熒光探針;DiR碘化物

    (DiR iodide)25MG [¥980.00]

     

    DiD, DiI, DiO, DiR家族細胞膜熒光探針簡介

    染料 DiD, DiI, DiO 和 DiR 是一類親脂性熒光染料家族,用于標記細胞膜等脂溶性生物結構和疏水性組織。這是一類環境敏感型熒光染料,當它們與膜結合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質,雖然在水中其熒光強度很弱)結合時,其熒光強度顯著增強。它們具有很高的淬滅系數,偏光依賴性和很短的激發壽命。一旦應用于細胞中,這種染料會在細胞內質膜中逐步擴散,導致在其最佳濃度條件下,將整個細胞膜染色。它們不同的熒光顏色:DiI(橙色熒光)、DiO(綠色熒光)、DiD(紅色熒光)、DiR(深紅色熒光),為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術提供了一種便捷的工具。

    圖1. 四種細胞膜熒光探針鑲嵌磷脂雙分子層的發射波長

    貨號

    品名

    熒光顏色

    分子量

    Ex (nm)

    Em (nm)

    MB6190

    DiD細胞膜紅色熒光探針

    紅色

    959.91

    644

    663

    特點

    DiD(紅色熒光)可以用來對活細胞進行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne 激光器激發,有著比 DiI 更長的激發波長和發射波長,為標記具有顯著內在熒光的細胞和組織提供了有價值的替代方案。

    應用實測

    本品配成 5mM 溶液后為深藍色液體溶液,澄清且無可見異物;

    進行熒光染色檢測:工作條件:熒光顯微鏡,C6 細胞,400×,工作濃度  5μM。

    結果:經細胞膜熒光染色,在40倍物鏡下可看到清晰紅色熒光。

     

    MB4239

    DiO細胞膜綠色熒光探針

    綠色

    881.72

    482

    500

    特點

    DiO可以使用標準的FITC濾光器。DiO通常不會明顯影響細胞的生存力,因此被廣泛用于正向或逆向的,活的或固定的神經等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-term tracer)。除了最簡單的細胞膜熒光標記外,還可以用于檢測細胞的融合和粘附,檢測發育或移植過程中細胞遷移,通過FRAP檢測脂在細胞膜上的擴散,檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。

    應用實測

     

    本品配成 5mM 溶液后為黃色液體溶液,澄清且無可見異物;進行熒光染色檢測:工作條件:熒光顯微鏡,NIH/3T3 細胞,400×,工作濃度 5μM。

    結果:經細胞膜熒光染色,在40倍物鏡下可看到清晰綠色熒光。 

     

    MB4240

    DiI細胞膜橙紅色熒光探針

    橙紅色

    933.88

    550

    567

    特點

    DiI 即 DiIC18(3),可以使用標準的TRITC濾光器。DiI比DiO更亮。DiI通常不會影響細胞的生存力,因此被廣泛用于正向或逆向的,活的或固定的神經等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-term tracer)。被DiI標記的神經細胞在體外培養的條件下可以存活長達4周,在體內可以長達一年。DiI在經過固定的神經元細胞膜上的遷移速率為0.2-0.6mm/day,在活的神經元細胞膜上的的遷移速率為6mm/day。DiI除了最簡單的細胞膜熒光標記外,還可以用于檢測細胞的融合和粘附,檢測發育或移植過程中細胞遷移,通過FRAP檢測脂在細胞膜上的擴散,檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。

    應用實測

    本品配成 5mM 溶液后為紫粉色液體溶液,澄清且無可見異物;

    進行熒光染色檢測:工作條件:熒光顯微鏡,C6 細胞,400×,工作濃度  5μM。

    結果:經細胞膜熒光染色,在40倍物鏡下可看到清晰橙紅色熒光。

     

    MB12482

    DiR細胞膜熒光探針;DiR碘化物

    深紅色

    1013.39

    748

    780

    特點

    DiR在活體成像或者示蹤中非常有用,因為其所發射的紅外光可以高效地穿過細胞和組織,并且在紅外光范圍內,其本底熒光水平很低。DiR 的兩個18-碳鏈插入到細胞膜,從而進行特定的、穩定的細胞染色,幾乎不會發生細胞間的染料轉移。

    應用實測

    用DIR-RGD-NP界定腫瘤相關血管

    (A)  Delineation of tumor vascularity. White light image of tumors showing  the outline of tumor-associated vasculature only when dye was administered in  RGD-coated nanoparticles; (B) Ex vivo imaging and colocalization of mCherry  and DIR signals in dissected tumors (from top: 2mm, 5mm, and 10mm in size).

    Source: Novel approach for the detection of intraperitoneal  micrometastasis using an ovarian cancer mouse model by Alvero et al.,  Scientific Reports, Jan. 2017.

     

    操作方法

    1. 染色液制備

    (1)配置DMSO或EtOH 儲存液:儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1~5 mM。

    【注】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃,避免反復凍融。

    (2)工作液制備:用合適的緩沖液(如:無血清培養基,HBSS或PBS)稀釋儲存液,配制濃度為1~5 μM的工作液。

    【注】工作液最終濃度建議根據不同細胞系和實驗體系來優化。建議從推薦濃度的10倍范圍內開始最優濃度的摸索。

    2. 懸浮細胞染色

    (1)加入適當體積的染色工作液重懸細胞,使其密度為1×106/mL。

    (2)37 ℃孵育細胞 2~20min,不同的細胞最佳培養時間不同??梢?0min作為起始孵育時間,之后優化體系以得到均一的標記結果。

    (3)孵育結束,按1000~1500 rpm離心5min。

    (4)傾倒上清液,再次緩慢加入37℃預熱的生長培養液重懸細胞。

    (5)重復(3),(4)步驟兩次以上。

    3. 貼壁細胞的染色 

    (1)將貼壁細胞培養于無菌蓋玻片上。

    (2)從培養基中移走蓋玻片,吸走過量培養液,將蓋玻片放在潮濕的環境中。

    (3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

    (4)37 ℃孵育細胞 2~20min,不同的細胞最佳培養時間不同??梢?0min作為起始孵育時間,之后優化體系以得到均一的標記結果。

    (5)吸干染料工作液,用培養液洗蓋玻片2~3次,每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞,孵育5~10min,然后吸干培養基。

    4. 顯微鏡檢測

    DiD,DiO,DiI,DiR選擇合適的濾光器觀察。

    5.流式細胞儀檢測

    經DiD,DiO,DiI,DiR染色的細胞可分別用流式細胞儀的FL1,FL2,FL3或FL4通道檢測

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